外泌体为什么需要做鉴定？

细胞外囊泡根据其产生方式不同和粒径大小不同，可分为外泌体、微囊泡和凋亡小体。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”，即外泌体。外泌体是一种30-150nm的细胞外囊泡，参与人体细胞的许多生理活动。人体几乎所有类型的细胞都能分泌外泌体，外泌体广泛存在并分布于各种体液中，携带多种蛋白质、mRNA、miRNA和脂质类物质等，作为重要的传递信号分子，形成了一种全新的细胞-细胞间信息传递系统，可参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程。来源于癌细胞的外泌体在临床诊断、早期肿瘤检测和分子治疗靶点识别等方面具有巨大的应用潜力。

 

 

外泌体的鉴定

1） 个体表征：电镜和NTA（纳米颗粒追踪技术）

个体表征的鉴定方法是电镜和NTA,电镜可以直接观察到单个外泌体的形态和大小.粒径分析是从整体上对外泌体的粒径大小、分布情况、运动轨迹、浓度进行检测。

 

透射电镜TEM

透射电镜把经加速和聚集的电子束投射到非常薄的样品上，电子与样品中的原子碰撞而改变方向，从而产生立体角散射。

散射角的大小与样品的密度、厚度相关，因此可以形成明暗不同的影像。透射电子显微镜的分辨率为0.1～0.2nm，放大倍数为几万～百万倍， 用于观察超微结构，即小于0.2µm、光学显微镜下无法看清的结构，又称“亚显微结构”。

 

泌体透射电镜图，脱水状态下呈茶托状

 

纳米颗粒跟踪分析技术（NTA）

纳米颗粒跟踪分析技术（Nanoparticle Tracking Analysis，NTA）是利用光散射和布朗运动的特性获得液体悬浮液中的样本粒度分布的检测方法。它能对悬浮液中粒径分布范围较宽的颗粒进行全方位表征，NTA技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一，相较于其他表征方式，NTA技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。该方法能保证外泌体原始状态，检测速度快、检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。

 

 

透射电镜、纳米流式和NTA对外泌体鉴定的比较

 

外泌体的分离鉴定技术日新月异，检测标准也将迎来规范化。IVD的下一匹“黑马”即将迎来它的春天。

 

国际囊泡协会（MISEV2018）规定了外泌体鉴定的最小实验要求，包括2） 总体表征：至少3个阳性蛋白（至少包括1个跨膜蛋白和1个细胞溶质蛋白）和1个阴性蛋白标志物。外泌体阳性蛋白标志物可选择跨膜蛋白CD9、CD63、CD81，以及溶质蛋白TSG101、Alix、HSP70。外泌体阴性蛋白标志物可选择内质网蛋白Calnexin、细胞核蛋白histone 3或高尔基体蛋白GM130。

 

 

 

上海研匠生物科技有限公司创立于2016年，是一家服务于生命科学与临床领域，以科研服务与技术研发创新为主的生物科技类公司。公司拥有完整的科研服务体系，专注于外泌体提取、外泌体粒径（NTA）、外泌体电镜、外泌体small RNA测序、外泌体细胞实验、外泌体动物实验、流式细胞服务、小动物行为学服务、小动物成像服务及外泌体服务相关产品的研发与销售。公司凭借10余年过硬的核心技术团队和先进的技术平台，与国内100+生物医药公司、高校及医院建立合作，成功开展5000+研究/研发项目，服务超2000+客户。