外泌体的鉴定方式

细胞外囊泡根据其产生方式不同和粒径大小不同，可分为外泌体、微囊泡和凋亡小体。外泌体是一种30-150nm的细胞外囊泡，参与人体细胞的许多生理活动。来源于癌细胞的外泌体在临床诊断、早期肿瘤检测和分子治疗靶点识别等方面具有巨大的应用潜力。

 

外泌体的鉴定

 

国际囊泡协会（MISEV2018）规定了外泌体鉴定的最小实验要求，包括

 

1） 总体表征：至少3个阳性蛋白（至少包括1个跨膜蛋白和1个细胞溶质蛋白）和1个阴性蛋白标志物。

外泌体阳性蛋白标志物可选择跨膜蛋白CD9、CD63、CD81，以及溶质蛋白TSG101、Alix、HSP70。

外泌体阴性蛋白标志物可选择内质网蛋白Calnexin、细胞核蛋白histone 3或高尔基体蛋白GM130。

2） 个体表征：电镜和NTA（纳米颗粒追踪技术）

 

个体表征的鉴定方法是电镜和NTA,电镜可以直接观察到单个外泌体的形态和大小.粒径分析是从整体上对外泌体的粒径大小、分布情况、运动轨迹、浓度进行检测。

透射电镜TEM

透射电镜把经加速和聚集的电子束投射到非常薄的样品上，电子与样品中的原子碰撞而改变方向，从而产生立体角散射。

散射角的大小与样品的密度、厚度相关，因此可以形成明暗不同的影像。透射电子显微镜的分辨率为0.1～0.2nm，放大倍数为几万～百万倍， 用于观察超微结构，即小于0.2µm、光学显微镜下无法看清的结构，又称“亚显微结构”。

外泌体透射电镜图，脱水状态下呈茶托状。

 

纳米颗粒跟踪分析技术（NTA）

NTA是利用光散射和布朗运动的特性获得悬浮液中样本粒度分布的检测方法。

检测中通过光学显微镜，可直接观察纳米颗粒，收集纳米颗粒的散射光信号，跟踪其布朗运动轨迹，对复杂样品具有极高的分辨率。

该方法能保证外泌体原始状态，检测速度快、检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。但它的灵敏度是70nm,且会把外泌体表面的水膜也检入，所以检出外泌体的粒径会比实际的偏大。

透射电镜、纳米流式和NTA对外泌体鉴定的比较

外泌体的分离鉴定技术日新月异，检测标准也将迎来规范化。IVD的下一匹“黑马”即将迎来它的春天。#外泌体#