Seahorse实验

17 人阅读发布时间：2026-02-26 15:38

Seahorse能量代谢分析技术是实时监测活细胞线粒体呼吸功能和糖酵解能力的关键技术，在生命科学、基础医学和药物研发等领域具有广泛应用。

研匠生物提供专业的Seahorse实验一站式服务，成熟的检测指标有：细胞ATP生成速率、线粒体压力、底物氧化压力、棕榈酸氧化压力、T 细胞代谢分析、糖酵解速率、糖酵解压力、T 细胞活化。助您精准解析细胞能量代谢状态。

1.实验方法：

1) 接种贴壁细胞：将细胞接种在XF96 细胞培养板上，每孔 80 μL 培养基，细胞数在 5~20 k/well 为佳，待细胞放入培箱中培养固定 1 h 后，再向每孔加入 70μL 培养基；在背景校正孔中加入 150 μL 培养基，不加细胞；将细胞培养板放入 37 ℃ CO2 细胞培养箱中培养过夜；

2) 水化探针板：在水化板（Utility Plate）中加入 200 μL/孔的无菌水，再放上探针板和盖子，轻微移动排出气泡后，在 37 ℃ 无 CO2 细胞培养箱中过夜；同时取出至少 20 mL 的 XF 校准液放入离心管中，37 ℃ 无 CO2 细胞培养箱中过

3) Seahorse Xfe96 系统预热：至少提前 5 小时打开仪器、电脑和软件进行预热；

4) 水化探针板：次日去除探针板装置，弃去 Utility Plate 中的无菌水，每孔加入 200 μL XF 校准液，放上探针板和盖子后，在 37 ℃ 无 CO₂ 细胞培养箱中水化 45~60 min；

5) 配置检测液：配置方法按试剂盒说明书进行，并根据实验需求进行调整；简而言之，一块培养板配置约 100 mL 检测液（97 mL 103575-100 试剂盒中加入 1 mL glucose（终浓度为 10 mM）、1 mL pyruvate(终浓度为 1 mM)、1 mL glutamine(终浓度为 2 mM)），调整检测液 PH 至 7.4，然后将使用 0.22 μm 细胞滤器过滤后放入 37 ℃ 温育备用；

6) 细胞换液：弃去细胞培养板中的培养基（留下 20 μL 覆盖细胞），加入 200 μL 检测液清洗 2 遍，彻底去除检测液，再加入 180 μL 检测液，将细胞放入 37 ℃ 无 CO₂ 细胞培养箱中 60 min 等待上机；

7) 配药：从试剂盒中取出一包药物，用检测液进行稀释，具体见下表

药物	重悬体积	稀释重悬液，每 3 mL 工作液中加入的重悬液体积	工作液浓度	终浓度
Oligomycin	630 μL	450 μL	15 μM	1.5 μM
FCCP	720 μL	300 μL	10 μM	1 μM
Rot/AA	540 μL	300 μL	5 μM	0.5 μM

推荐 Oligomycin 上机终浓度为 1.5 μM，Rot/AA 上机终浓度为 0.5 μM，FCCP 上机终浓度为 0~2 μM，2~3 mL 药物工作液为 10x 浓度装载入探针板，例如：想获得终浓度为 1.5 μM 的 Olygomycin，需加入 630 μL 检测液重悬，混匀后从重悬液中取出 450 μL 并加入 2 550 μL 检测液配置 3 mL 15 μM 的工作液；

9) 加药：探针板中每孔加入 20 μL 配制好的药物，加药时保持探针板水平，枪头略倾斜于探针板，枪头深入孔中但不能没入液体，药物不能挂壁；加药顺序为：（实验所需细胞药物）-Oligomycin-FCCP-Rot/AA。

10) 上机运行：根据实验设计完成组定义设置，StartRun 运行实验，按照提示将去掉盖子的探针板防止于托盘上，进行校准（约 20 min）；校准完毕后将 Utility Plate 换成细胞培养板，并开始进行细胞能量代谢测试，测量结束后点击 Eject 取出细胞培养板和探针板，并对数据进行归一化处理。

2. 交付内容及标准：

完整的实验报告：实验材料，实验方法，结果分析

梳理好的原始数据：检测结果