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技术资料/正文
研匠宝典之细胞培养方法
255 人阅读发布时间：2023-09-25 09:18
细胞培养操作
一、准备工作：
二、细胞复苏（原则 缓冻速溶）：
三、贴壁细胞的传代培养：
四、半贴壁细胞的传代培养：
同贴壁细胞的传代培养（除去2、3、4步）
五、冻存：
冻存液：20%胎牛血清+70%基础培养基+10%DMSO
注：
无菌操作的关键是有可能接触细胞的任何物品不能接触到为灭菌的物品。
一、准备工作：
- 75％酒精擦超净台工作台台面，摆好废液缸。
- 开紫外灯照射超净工作台15分钟；
- 关闭紫外灯后开鼓风机吹5分钟；
- 取出所需的培养基，PBS，胰酶、所用器械如吸管、移液管、离心管等。
- 戴手套，75％酒精擦拭；
二、细胞复苏（原则 缓冻速溶）：
- 准备37℃水浴；
- 从液氮中取出细胞；
- 迅速置37℃水浴，1min内融化；
- 净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加 10ml 培养液，吹打使细胞悬浮。
- 低速离心（ 500 ～ 1000 转 / 分） 5 分钟，去上清。
- 加10ml培养基重悬细胞，置温箱培养。
三、贴壁细胞的传代培养：
- 打开培养皿（瓶）盖（盖放在“非工作区”， 盖、培养皿口不能接触任何物品），倾斜吸出（可用真空泵）所有的培养基；
- 加入2mlPBS洗涤，倾斜吸出PBS；
- 加入0.5ml-1ml胰酶溶液，混匀，倾斜吸出多余胰酶，不必吸干；
- 37℃消化1-3分钟，倾斜培养皿看到细胞自由流动即可；
- 用吸管加入约4ml完全培养基，用吸管将细胞吹打下来；
- 将细胞悬液分配至新的培养瓶（皿）中，再用移液管加入8ml新鲜的培养基，盖盖。
- 收培养基瓶，盖盖；
- 收离心管，吸管，冲洗；
- 75％酒精檫台面，冲洗废液缸；
- 关闭超净工作台。
四、半贴壁细胞的传代培养：
同贴壁细胞的传代培养（除去2、3、4步）
五、冻存：
- 接贴壁细胞的传代培养中第4步（避免消化时间过长，否则会影响冻存质量）；
- 用移液管加2ml冻存液，用吸管将细胞吹打下来；
- 移入2ml冻存管（1ml/管），标记冻存管；
- 置于液氮液面上；
- 12-24h后放入液氮，记录。
冻存液：20%胎牛血清+70%基础培养基+10%DMSO
注：
无菌操作的关键是有可能接触细胞的任何物品不能接触到为灭菌的物品。